Protocols

凝膠內染色（In-gel staining）

1.準備100毫升瓊脂糖凝膠溶液（濃度為0.8-3.0％）并加熱，直到溶液完全澄清且看不到小漂浮顆粒為止。

2.在凝膠溶液中加入4-6 μl MIDORI Green Advance DNA Stain，輕輕混勻。將凝膠冷卻至50-60oC，然后將凝膠澆鑄到凝膠托盤中。當凝膠為固體時，加載樣品并進行電泳。

3.使用UV或LED照明器檢測和拍照。

后染（Poststaining）

1.MIDORI Green Advance DNA Stain后染液可以使用2-3次。

2.將要重復使用的染色溶液應優選在室溫下避光保存。

3.對于<0.5 cm厚的瓊脂糖凝膠，每100 ml緩沖液應使用10-25 μl的染料。

4.最佳的染色時間（5 – 60分鐘）和染料的用量可能取決于凝膠的厚度。

注意：不建議用含有SDS的上樣緩沖液（Loading Buffers），因為染料和SDS相互作用會導致條帶出現！

常見問題（FAQ）

Q1. 為什么Midori Green比溴化乙錠（EB）或SYBR Green更安全？

有以下三個原因：

1）Midori Green與DNA分子的結合較少，因此在合成過程中發生的突變較少。

2）Midori Green不會穿透皮膚或質膜，因此對活細胞的吸收非常少。

3）Midori Green的半衰期很短，因此在環境中會很快分解。

在Midori Green上進行的廣泛測試證明了這一點。詳情可以下載安全報告。

五種安全測試

I. Ames Test（污染物致突變性檢測）

II. The Acute Oral Toxicity Test（急性口腔毒性試驗）

III. The Mouse Bone Marrow Micronucleus Test（小鼠骨髓細胞微核試驗）

IV. Chromosome Aberration Test（染色體畸變測試）

V. Latex And Nitrile Gloves Penetration Test （乳膠和丁腈手套的滲透測試）

Q2. Midori Green使用后如何處置？

Midori Green不會產生任何有毒廢物。 因此，可以根據實驗室規定按無毒廢物進行處理。

Q3. 可以在聚丙烯酰胺/尿素凝膠中使用MIDORI Green Advance嗎？

 可以的。

Q4. 可以在尿素/甲酰胺凝膠中使用MIDORI Green 嗎？

 不可以的，因為甲酰胺的原因。尿素凝膠是可以的。

Q5. MIDORI Green Advance是否含有DMSO？

不含（DMSO Free）。

Q6. 我可以使用紫外線透射燈還是需要購買LED照明器？

具體看。 Midori Green Advance和Midori Green Direct不需要LED照明器，只要您的紫外線工作臺的發射波長為270 nm或更高，就可以令人滿意。 為了獲得最佳結果，我們建議您使用藍色LED或藍色/綠色LED照明器。

Midori Green Xtra與紫外線照明不兼容，但是藍色LED和藍色/綠色LED光源都可以很好地工作。

Q7. 當使用Midori Green Direct時，我的凝膠上的條帶看起來是波浪形的。什么原因？

Midori Green Direct是一個大分子，因此它不會穿透皮膚或穿過質膜。 由于其大小，該分子可能會卡在凝膠基質中。 “波浪帶”問題主要是由于樣品中添加了過多的Midori Green Direct所致，因此，我們建議使用1:10的比率--每個樣本不超過0.5μL，即使小于1:10！ 幫助改善這種效果。

Q8. Midori Green可以與TAE和TBE一起使用嗎？

是的。TAE和TBE緩沖液均與瓊脂糖凝膠中的Midori Green相容。 Midori Green在這些緩沖溶液中具有良好的穩定性，只要將凝膠保存在防光的儲存容器中，它將繼續提供很強的信號。

Q9. 是否可以像使用溴化乙錠（EB）那樣，在瓊脂糖凝膠中用Midori Green對DNA染色？

是的。 Midori Green可以像EB一樣用于凝膠中。 但是，后染的靈敏度應比預制凝膠內染色更好，從而消除了染料干擾核酸條帶遷移和分離的任何可能性。

Q10. Midori Green可以用于后染嗎？

可以的。

Q11. 用于后染色時，應如何稀釋Midori Green Advance？

將5-15 μL Midori Green Advance加入100 mL緩沖溶液中。 根據您的實驗調整最佳濃度和染色持續時間（通常為5至60分鐘）。

Q12. Midori Green是否在凝膠中遷移？

是的，Midori Green帶正電，與DNA和RNA條帶的運行方向相反。 這可能導致明暗背景過渡。 對于電泳凝膠，我們建議使用最佳電泳時間和瓊脂糖百分比。 對于更長的產品/運行時間，我們建議進行后染。

Q13. Midori Green可以稀釋嗎？

是的。 Midori Green溶液可以在超純水中稀釋。

Q14. 我們可以將Midori Green用于RNA嗎？像DNA那樣。

是的。 Midori Green的所有三種類型染料（Advance，Direct，Xtra）均會產生非常強烈的RNA，dsDNA和ssDNA染色信號。

Q15. Midori Green可以使用哪些濾光片（波長）？

設計用于綠色染料的濾光片（例如GFP / SYBR綠色濾光片）最敏感。 對于Midori Green Advance和Midori Green Direct，也可以使用EB濾光片或僅使用不含任何濾光片的紫外線。

Q16. 在加熱過程中，是否可以向溶解在TAE緩沖液中的瓊脂糖中添加Midori Green？

不可以。不建議將Midori Green添加到熱瓊脂糖溶液中。 我們建議將瓊脂糖溶液冷卻至約60°C，加入Midori Green，然后小心搖動并充分混合。

Q17. Midori Green是否檢測到低DNA濃度？

是的。 Midori Green在低DNA濃度以及小的DNA片段（≥100個堿基）下表現良好。

Q18. Midori Green是否會干擾下游應用？

它可能取決于你后續的實驗。 為了避免在下游處理步驟中使用Midori Green，您可以先使用純化試劑盒純化DNA。

Q19. Midori Green可以用于脈沖場凝膠電泳嗎？

否。不建議使用?？梢院笕?。

Q20. 是否可以將Midori Green用于Southern Blot印跡實驗？

是的。 Midori Green是用于Southern Blot實驗的DNA染色染料的理想選擇。 它不會干擾轉移至印跡或與探針雜交。

Q21. Midori Green一旦跑膠，是否會干擾從染色凝膠中回收DNA？

不會。Midori Green通常不會與DNA或RNA共純化。

Q22. Midori Green應該存放在哪里？

為了獲得最佳性能和穩定性，Midori Green應該在避光保存（Midori Green在棕色小管中提供給客戶）。

Q23. Midori Green會滲透乳膠手套嗎？

不會。Midori Green分子太大，無法穿透乳膠手套。

Q24. 我發現使用Midori Green Advance時，電泳后凝膠底部看起來更暗。為什么是這樣？

Midori Green帶正電，因此凝膠基質中的游離染料將向凝膠頂部遷移，并形成較暗的正面。僅當將Midori Green Advance或Midori Green Xtra添加到熔融瓊脂糖中時，才能看到此效果。為了提供更一致的背景，您可以進行后染色或使用Midori Green Direct（直接添加到樣品中）。

Q25. 凝膠中Midori Green Advance的背景熒光太高，很難看到較暗的DNA條帶。是否有建議改善這些微弱頻段的信噪比？

是的。如果在100 mL瓊脂糖凝膠中使用4 μL Midori Green Advance仍能看到較高的背景，則降低至2 μL。這只會降低背景信號；微弱的條帶仍會被染料浸透。這對于我們的藍/綠LED技術尤其有效，該技術可為所有綠色和紅色染料提供更亮的信號。

Q25. Midori Green會導致我的DNA條帶遷移率發生變化嗎？

不會，但有一個例外。 Midori Green Advance和Midori Green Xtra不會改變DNA條帶的遷移速率。 另一方面，如果樣品中添加的Midori Green Direct過多，則可能會導致條帶遷移不同。 結果，盡管我們通常建議對樣品使用1:10的稀釋度，但每個樣品的量絕對不能超過0.5 μL Midori Green Direct。 遵循這一經驗法則，條帶應該不會出現任何不正常的變化。

Q26. Midori Green Advance可以用于變性甲醛凝膠以分離RNA嗎？

是的，可以使用：

我們使用后染色和凝膠染色兩種方法，用TAE緩沖液從1％甲醛凝膠中分離了總RNA。 在每種情況下，每100 ml緩沖液使用5微升。 后染色在室溫下進行1小時。

每條線的最低RNA濃度應至少為250 ng。 良好的工作RNA濃度在500 ng。

Q27. 是否可以將Midori Green Advance添加到跑膠緩沖液中以減少凝膠的變色？ 如果是，我應該使用多少量？

您可以在跑膠緩液中使用Midori Green Advance。 這種情況，每100 ml緩沖液應使用8 μL。

Q28. 到有效期后可以繼續使用Midori Green Advance嗎？

是的，您可以使用它。 到期日期只是我們保證的最短時間，但通常會持續更長的時間。

Q29. 如果我將Midori Green Advance在-20°C下存儲6天會怎樣？ 可以使用嗎？

凍結會破壞MGA的功能。 您仍然可以嘗試，但我們的經驗建議 別再使用。

Q30. 我在瓊脂糖凝膠中使用Midori Green Advance，為什么在凝膠電泳35分鐘后看不見小條帶，您有什么建議？

Midori Green Advance帶有正電荷，并且與DNA的電泳移動方向相反，因此凝膠從底部脫色。 要查看小條帶，您可以將運行時間減少到25分鐘。 如果您想讓凝膠運行更長的時間，那么建議后染。 您可以使用箱凝膠內染色，然后短時間的后染，或者僅對凝膠進行后染而無需先前的凝膠內染色。 在這兩種情況下，整個凝膠都會被染色，并且觀察到非常低的分子量帶。 您也可以使用Midori Green Direct代替Midori Green Advance。 這種染料會添加到DNA中，因此無論電泳多長時間，每個條帶都會被染色。 另一個優點是不存在背景。 特別是，如果您使用藍色或藍色/綠色LED燈代替紫外線，則會看到令人驚奇的信號。

Q31. 使用Midori Green Xtra和Orange G作為Loading染料，我在瓊脂糖凝膠中看到了白色彌散（Smear）。

是的，Midori Green Xtra和Orange G的結合，在使用紫外線會導致白色彌散。 為避免這種情況，請使用藍色或藍色/綠色LED檢測系統或使用其他Loading染料。

Q32. 在4°C下儲存后，染料會沉淀出來。 您有什么推薦的嗎？

我們建議將染料加熱至室溫或37°C幾分鐘。 使用前請渦旋混勻染料。

1.操作手冊（Manual）：Protocol AG09_Midori Green Advance TBE Agarose Tablets

2.安全檢測報告（Safety Report）：Safety Report for MIDORIGreen 

3.安全數據表（Safety Data Sheet）：SDS_Midori Green Advance TBE Agarose Tablets

4.使用提示（Application Note）：

1). Technical Note 2018_02