Protocols

凝膠內(nèi)染色（In-gel staining）

1.準(zhǔn)備100毫升瓊脂糖凝膠溶液（濃度為0.8-3.0％）并加熱，直到溶液完全澄清且看不到小漂浮顆粒為止。

2.在凝膠溶液中加入4-6 μl MIDORI Green Advance DNA Stain，輕輕混勻。將凝膠冷卻至50-60oC，然后將凝膠澆鑄到凝膠托盤中。當(dāng)凝膠為固體時，加載樣品并進(jìn)行電泳。

3.使用UV或LED照明器檢測和拍照。

后染（Poststaining）

1.MIDORI Green Advance DNA Stain后染液可以使用2-3次。

2.將要重復(fù)使用的染色溶液應(yīng)優(yōu)選在室溫下避光保存。

3.對于<0.5 cm厚的瓊脂糖凝膠，每100 ml緩沖液應(yīng)使用10-25 μl的染料。

4.最佳的染色時間（5 – 60分鐘）和染料的用量可能取決于凝膠的厚度。

注意：不建議用含有SDS的上樣緩沖液（Loading Buffers），因?yàn)槿玖虾蚐DS相互作用會導(dǎo)致條帶出現(xiàn)！

常見問題（FAQ）

Q1. 為什么Midori Green比溴化乙錠（EB）或SYBR Green更安全？

有以下三個原因：

1）Midori Green與DNA分子的結(jié)合較少，因此在合成過程中發(fā)生的突變較少。

2）Midori Green不會穿透皮膚或質(zhì)膜，因此對活細(xì)胞的吸收非常少。

3）Midori Green的半衰期很短，因此在環(huán)境中會很快分解。

在Midori Green上進(jìn)行的廣泛測試證明了這一點(diǎn)。詳情可以下載安全報告。

五種安全測試

I. Ames Test（污染物致突變性檢測）

II. The Acute Oral Toxicity Test（急性口腔毒性試驗(yàn)）

III. The Mouse Bone Marrow Micronucleus Test（小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)）

IV. Chromosome Aberration Test（染色體畸變測試）

V. Latex And Nitrile Gloves Penetration Test （乳膠和丁腈手套的滲透測試）

Q2. Midori Green使用后如何處置？

Midori Green不會產(chǎn)生任何有毒廢物。 因此，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)定按無毒廢物進(jìn)行處理。

Q3. 可以在聚丙烯酰胺/尿素凝膠中使用MIDORI Green Advance嗎？

 可以的。

Q4. 可以在尿素/甲酰胺凝膠中使用MIDORI Green 嗎？

 不可以的，因?yàn)榧柞０返脑颉Ｄ蛩啬z是可以的。

Q5. MIDORI Green Advance是否含有DMSO？

不含（DMSO Free）。

Q6. 我可以使用紫外線透射燈還是需要購買LED照明器？

具體看。 Midori Green Advance和Midori Green Direct不需要LED照明器，只要您的紫外線工作臺的發(fā)射波長為270 nm或更高，就可以令人滿意。 為了獲得最佳結(jié)果，我們建議您使用藍(lán)色LED或藍(lán)色/綠色LED照明器。

Midori Green Xtra與紫外線照明不兼容，但是藍(lán)色LED和藍(lán)色/綠色LED光源都可以很好地工作。

Q7. 當(dāng)使用Midori Green Direct時，我的凝膠上的條帶看起來是波浪形的。什么原因？

Midori Green Direct是一個大分子，因此它不會穿透皮膚或穿過質(zhì)膜。 由于其大小，該分子可能會卡在凝膠基質(zhì)中。 “波浪帶”問題主要是由于樣品中添加了過多的Midori Green Direct所致，因此，我們建議使用1:10的比率--每個樣本不超過0.5μL，即使小于1:10！ 幫助改善這種效果。

Q8. Midori Green可以與TAE和TBE一起使用嗎？

是的。TAE和TBE緩沖液均與瓊脂糖凝膠中的Midori Green相容。 Midori Green在這些緩沖溶液中具有良好的穩(wěn)定性，只要將凝膠保存在防光的儲存容器中，它將繼續(xù)提供很強(qiáng)的信號。

Q9. 是否可以像使用溴化乙錠（EB）那樣，在瓊脂糖凝膠中用Midori Green對DNA染色？

是的。 Midori Green可以像EB一樣用于凝膠中。 但是，后染的靈敏度應(yīng)比預(yù)制凝膠內(nèi)染色更好，從而消除了染料干擾核酸條帶遷移和分離的任何可能性。

Q10. Midori Green可以用于后染嗎？

可以的。

Q11. 用于后染色時，應(yīng)如何稀釋Midori Green Advance？

將5-15 μL Midori Green Advance加入100 mL緩沖溶液中。 根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)調(diào)整最佳濃度和染色持續(xù)時間（通常為5至60分鐘）。

Q12. Midori Green是否在凝膠中遷移？

是的，Midori Green帶正電，與DNA和RNA條帶的運(yùn)行方向相反。 這可能導(dǎo)致明暗背景過渡。 對于電泳凝膠，我們建議使用最佳電泳時間和瓊脂糖百分比。 對于更長的產(chǎn)品/運(yùn)行時間，我們建議進(jìn)行后染。

Q13. Midori Green可以稀釋嗎？

是的。 Midori Green溶液可以在超純水中稀釋。

Q14. 我們可以將Midori Green用于RNA嗎？像DNA那樣。

是的。 Midori Green的所有三種類型染料（Advance，Direct，Xtra）均會產(chǎn)生非常強(qiáng)烈的RNA，dsDNA和ssDNA染色信號。

Q15. Midori Green可以使用哪些濾光片（波長）？

設(shè)計用于綠色染料的濾光片（例如GFP / SYBR綠色濾光片）最敏感。 對于Midori Green Advance和Midori Green Direct，也可以使用EB濾光片或僅使用不含任何濾光片的紫外線。

Q16. 在加熱過程中，是否可以向溶解在TAE緩沖液中的瓊脂糖中添加Midori Green？

不可以。不建議將Midori Green添加到熱瓊脂糖溶液中。 我們建議將瓊脂糖溶液冷卻至約60°C，加入Midori Green，然后小心搖動并充分混合。

Q17. Midori Green是否檢測到低DNA濃度？

是的。 Midori Green在低DNA濃度以及小的DNA片段（≥100個堿基）下表現(xiàn)良好。

Q18. Midori Green是否會干擾下游應(yīng)用？

它可能取決于你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 為了避免在下游處理步驟中使用Midori Green，您可以先使用純化試劑盒純化DNA。

Q19. Midori Green可以用于脈沖場凝膠電泳嗎？

否。不建議使用。可以后染。

Q20. 是否可以將Midori Green用于Southern Blot印跡實(shí)驗(yàn)？

是的。 Midori Green是用于Southern Blot實(shí)驗(yàn)的DNA染色染料的理想選擇。 它不會干擾轉(zhuǎn)移至印跡或與探針雜交。

Q21. Midori Green一旦跑膠，是否會干擾從染色凝膠中回收DNA？

不會。Midori Green通常不會與DNA或RNA共純化。

Q22. Midori Green應(yīng)該存放在哪里？

為了獲得最佳性能和穩(wěn)定性，Midori Green應(yīng)該在避光保存（Midori Green在棕色小管中提供給客戶）。

Q23. Midori Green會滲透乳膠手套嗎？

不會。Midori Green分子太大，無法穿透乳膠手套。

Q24. 我發(fā)現(xiàn)使用Midori Green Advance時，電泳后凝膠底部看起來更暗。為什么是這樣？

Midori Green帶正電，因此凝膠基質(zhì)中的游離染料將向凝膠頂部遷移，并形成較暗的正面。僅當(dāng)將Midori Green Advance或Midori Green Xtra添加到熔融瓊脂糖中時，才能看到此效果。為了提供更一致的背景，您可以進(jìn)行后染色或使用Midori Green Direct（直接添加到樣品中）。

Q25. 凝膠中Midori Green Advance的背景熒光太高，很難看到較暗的DNA條帶。是否有建議改善這些微弱頻段的信噪比？

是的。如果在100 mL瓊脂糖凝膠中使用4 μL Midori Green Advance仍能看到較高的背景，則降低至2 μL。這只會降低背景信號；微弱的條帶仍會被染料浸透。這對于我們的藍(lán)/綠LED技術(shù)尤其有效，該技術(shù)可為所有綠色和紅色染料提供更亮的信號。

Q25. Midori Green會導(dǎo)致我的DNA條帶遷移率發(fā)生變化嗎？

不會，但有一個例外。 Midori Green Advance和Midori Green Xtra不會改變DNA條帶的遷移速率。 另一方面，如果樣品中添加的Midori Green Direct過多，則可能會導(dǎo)致條帶遷移不同。 結(jié)果，盡管我們通常建議對樣品使用1:10的稀釋度，但每個樣品的量絕對不能超過0.5 μL Midori Green Direct。 遵循這一經(jīng)驗(yàn)法則，條帶應(yīng)該不會出現(xiàn)任何不正常的變化。

Q26. Midori Green Advance可以用于變性甲醛凝膠以分離RNA嗎？

是的，可以使用：

我們使用后染色和凝膠染色兩種方法，用TAE緩沖液從1％甲醛凝膠中分離了總RNA。 在每種情況下，每100 ml緩沖液使用5微升。 后染色在室溫下進(jìn)行1小時。

每條線的最低RNA濃度應(yīng)至少為250 ng。 良好的工作RNA濃度在500 ng。

Q27. 是否可以將Midori Green Advance添加到跑膠緩沖液中以減少凝膠的變色？ 如果是，我應(yīng)該使用多少量？

您可以在跑膠緩液中使用Midori Green Advance。 這種情況，每100 ml緩沖液應(yīng)使用8 μL。

Q28. 到有效期后可以繼續(xù)使用Midori Green Advance嗎？

是的，您可以使用它。 到期日期只是我們保證的最短時間，但通常會持續(xù)更長的時間。

Q29. 如果我將Midori Green Advance在-20°C下存儲6天會怎樣？ 可以使用嗎？

凍結(jié)會破壞MGA的功能。 您仍然可以嘗試，但我們的經(jīng)驗(yàn)建議 別再使用。

Q30. 我在瓊脂糖凝膠中使用Midori Green Advance，為什么在凝膠電泳35分鐘后看不見小條帶，您有什么建議？

Midori Green Advance帶有正電荷，并且與DNA的電泳移動方向相反，因此凝膠從底部脫色。 要查看小條帶，您可以將運(yùn)行時間減少到25分鐘。 如果您想讓凝膠運(yùn)行更長的時間，那么建議后染。 您可以使用箱凝膠內(nèi)染色，然后短時間的后染，或者僅對凝膠進(jìn)行后染而無需先前的凝膠內(nèi)染色。 在這兩種情況下，整個凝膠都會被染色，并且觀察到非常低的分子量帶。 您也可以使用Midori Green Direct代替Midori Green Advance。 這種染料會添加到DNA中，因此無論電泳多長時間，每個條帶都會被染色。 另一個優(yōu)點(diǎn)是不存在背景。 特別是，如果您使用藍(lán)色或藍(lán)色/綠色LED燈代替紫外線，則會看到令人驚奇的信號。

1.操作手冊（Manual）：MG03-04_Midori-Green-Advance_Manual-1

2.安全檢測報告（Safety Report）：Safety Report for MIDORI Green Advance

3.安全數(shù)據(jù)表（Safety Data Sheet）：MG03-MG04_Midori-Green-Advance_MSDS_englisch

4.使用提示（Application Note）：

1). MG04_MGA plus FAs-Digi_AN_2018_10

2). AN_Midori_Green_Advanced(MG04)_2015_01E

3). MG04_Midori Green Advance_AN_2016_03

4). MG04_Midori Green Advance_AN_2014_01E

5). MG04_MGA plus Fas-Nano_AN_2018_11

6). Technical Note 2018_01